TP : lumière et chlorophylle (guide)
Diversité et complémentarité des métabolismes
1 Séparation des pigments foliaires
L'atmosphère de la cuve, remplie d'un mélange d'éther de pétrole et d'acétone doit être saturée de vapeurs (ne pas l'ouvrir inutilement, le mélange de solvants est toxique et très inflammable).
- Sur le papier Whatman, tracer un trait au crayon à papier à 3 cm du bord inférieur sans jamais y appliquer les doigts.
- Placer la bande de papier sur de la faïence très propre et écraser avec l'extrémité plate d'un agitateur une rondelle de feuille au milieu du trait de crayon. Laisser sécher en agitant après avoir enlevé avec une pince d'éventuels débris végétaux.
- Accrocher la bande au crochet du bouchon et la descendre délicatement dans le bocal à chromatographie en ayant soin que le niveau du solvant se situe entre l'extrémité de la bande et le trait de crayon portant la tache verte. Le niveau du liquide ne doit jamais toucher la tache de pigments. La bande de papier ne doit pas non plus toucher les bords du bocal.
- Recouvrir le bocal avec le cache noir et laisser la migration s'effectuer (1h environ); pendant ce temps, faire les parties 2 et 3 du TP.
- Lorsque le front du solvant atteint le crochet, sortir la bande et entourer soigneusement au crayon à papier les différentes taches qui sont visibles (les pigments sont rapidements décolorés par la lumière).
2 Spectre d'absorption de la chlorophylle brute
- Broyer quelques feuilles dans un mortier.
- Couvrir de 5 cm3 dacétone et continuer à broyer.
- Filtrer en recueillant la solution dans un petit tube à essai; reprendre le résidu du filtre avec 5 cm3 dacétone et flitrer à nouveau (ajouter le liquide au filtrat précédent).
- Observer au spectroscope; remarque : l'absorbance peut être mesurée avec un spectrographe (en démonstration au bureau).