Mise en évidence de la décoloration du DCPIP : , vivement conseillé; Expérience de Hill transposée en ExAO : ; il est souhaitable mais non nécessaire d'isoler les chloroplastes par centrifugation, ce qui prend un temps assez long. L'originalité de ce TP est d'utiliser la colorimétrie, plus fiable, plutôt que l'oxymétrie pour suivre la réaction (cf Daric,1998) |
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1 Bureau
feuilles dEpinard ou de Cresson
papier aluminium (si on utilise de petits tubes à essai)
centrifugeuse (à laisser au labo)
cuve réfrigérante (en marche)
mortier avec pilon à placer au congélateur
support, entonnoir et coton
2 cuves à colorimétrie (ou 2 petits tubes à essai)
réserve de cuves à colorimétrie
support pour ces tubes (suffisamment large pour les tubes enveloppés de papier alu) ou support à cuve.
petit bécher
bain à sec (le plus grand) réglé à 90°C avec thermomètre témoin
tubes à essai normaux placés dans ce bain à sec (1 par groupe d'élèves)
tampon phosphate saccharose (500cm3) placé au réfrigérateur ou dans la cuve réfrigérante.
2,6 DCPIP à 1g/L (20cm3) à dissoudre dans du tampon phosphate
hydrosulfite de sodium Na2S2O4 en solution saturée avec pipette 1mL
tampon phosphate-sacharose PH 5,6 (pour 1L):
(matériel : mortier avec pilon placé au congélateur, support, entonnoir et coton, tubes à centrifuger et support métallique pour tubes, pinceau)
papier aluminium (si on utilise de petits tubes à essai)
centrifugeuse (à laisser au labo)
cuve réfrigérante (en marche)
mortier avec pilon à placer au congélateur
support, entonnoir et coton
2 cuves à colorimétrie (ou 2 petits tubes à essai)
réserve de cuves à colorimétrie
support pour ces tubes (suffisamment large pour les tubes enveloppés de papier alu) ou support à cuve.
petit bécher
bain à sec (le plus grand) réglé à 90°C avec thermomètre témoin
tubes à essai normaux placés dans ce bain à sec (1 par groupe d'élèves)
tampon phosphate saccharose (500cm3) placé au réfrigérateur ou dans la cuve réfrigérante.
2,6 DCPIP à 1g/L (20cm3) à dissoudre dans du tampon phosphate
hydrosulfite de sodium Na2S2O4 en solution saturée avec pipette 1mL
tampon phosphate-sacharose PH 5,6 (pour 1L):
hydrogénophosphate disodique 71,6gsuspension de chloroplastes :
dihydrogénophosphate de potassium 13,6g
saccharose 171g
Bovin Serum Albumin 0,1g
(matériel : mortier avec pilon placé au congélateur, support, entonnoir et coton, tubes à centrifuger et support métallique pour tubes, pinceau)
écraser quelques feuilles d'épinard;
ajouter un peu de tampon;
filter sur coton;
centrifuger 6min à 1500g (facultatif);
vider le surnageant et reprendre le culot de centrifugation avec un pinceau dans du tampon (si centrifugation).
2 Par groupe
2 cuves à colorimétrie (ou 2 petits tubes à essai)
2 bouchons pleins pour boucher ces cuves (de petits interstices dans les coins sont de peu d'importance)
support pour cuves à colorimétrie (ou pour tubes à essai, suffisamment large pour les tubes enveloppés de papier aluminium)
1 seringue 1mL avec catéther
1 lampe (ampoule à halogène)
chaîne ExAO
logiciel Généris
colorimètre
adaptateur voltmètre (facultatif)
cache en papier noir pour recouvrir si nécessaire la cuve à colorimétrie entre les mesures
1 mortier (les placer tous au congélateur avec les pilons)
1 support à entonnoir
1 entonnoir et un petit morceau de coton
1 petit bécher
2 bouchons pleins pour boucher ces cuves (de petits interstices dans les coins sont de peu d'importance)
support pour cuves à colorimétrie (ou pour tubes à essai, suffisamment large pour les tubes enveloppés de papier aluminium)
1 seringue 1mL avec catéther
1 lampe (ampoule à halogène)
chaîne ExAO
logiciel Généris
colorimètre
adaptateur voltmètre (facultatif)
cache en papier noir pour recouvrir si nécessaire la cuve à colorimétrie entre les mesures
1 mortier (les placer tous au congélateur avec les pilons)
1 support à entonnoir
1 entonnoir et un petit morceau de coton
1 petit bécher
Références
Benlot C. Blanchouin N. Prat R. Rubinstein J.-P. Vonarx V.. 2002. Expérience de Hill. www.snv.jussieu.fr/bmedia/Photosynthese/exp44.html
Daric V.. 1998. www.librapport.com/fichiers/documents/94/document.pdf Université Paris 7.
Faucher M.. . Mise en évidence du transfert photosynthétique des électrons par des chloroplastes éclairés. Université d'Orléans-Tours. www.univ-orleans.fr/SCIENCES/BIOLOGIE/TPPV/TPdoc/Transfert_Photo_Electron_Eclaires.htm (Ce document n'est plus en ligne).
Hazard B.. 1995. Sciences de la vie et de la Terre, guide pratique première scientifique. Nancy, CRDP de Lorraine : 122-129
Lombard F. tecfa.unige.ch/~lombardf/logiciels/nrj-dule/
Prat R.. 1994. L'expérimentation en physiologie végétale. Hermann, Paris : 120-125.
Pol D.. 1994. Travaux pratiques de biologie. Paris, Bordas : 125.
Pol D.. 1999. Activité photochimique de chloroplastes isolés. www.didier-pol.net/2TPHILL.htm
Daric V.. 1998. www.librapport.com/fichiers/documents/94/document.pdf Université Paris 7.
Faucher M.. . Mise en évidence du transfert photosynthétique des électrons par des chloroplastes éclairés. Université d'Orléans-Tours. www.univ-orleans.fr/SCIENCES/BIOLOGIE/TPPV/TPdoc/Transfert_Photo_Electron_Eclaires.htm (Ce document n'est plus en ligne).
Hazard B.. 1995. Sciences de la vie et de la Terre, guide pratique première scientifique. Nancy, CRDP de Lorraine : 122-129
Lombard F. tecfa.unige.ch/~lombardf/logiciels/nrj-dule/
Prat R.. 1994. L'expérimentation en physiologie végétale. Hermann, Paris : 120-125.
Pol D.. 1994. Travaux pratiques de biologie. Paris, Bordas : 125.
Pol D.. 1999. Activité photochimique de chloroplastes isolés. www.didier-pol.net/2TPHILL.htm