TP : la phase photochimique de la photosynthèse : oxymétrie  (guide)

Le DCPI peut être remplacé par du chlorure ferrique, on se prive alors de la partie 2

L'origine du dioxygène ↓ Pouvoir réducteur d’un extrait de chloroplastes ↓ Réduction du DCPIP et dégagement de dioxygène ↓   TP

1 L'origine du dioxygène

Equation globale de la photosynthèse réécrite :

2 Pouvoir réducteur d’un extrait de chloroplastes

• Broyez quelques feuilles d’Epinard ou de Cresson dans un mortier (pour les épinards, une feuille suffit, enlevez les pétioles); vers la fin du broyage, ajouter 20 ml de tampon phosphate.
• Filtrez sur un coton pour éliminer les grosses particules; assurez vous que la couleur verte n'est pas trop intense et ne masque pas celle du DCPIP, diluez si nécessaire avec du tampon et remplissez un petit tube ou une cuve à colorimétrie (environ 3mL); la centrifugation du filtrat pour isoler les chloroplastes peut être réalisée, mais elle n'est pas indispensable.
• Ajoutez 0,5mL de DCPIP avec la seringue, agitez; bouchez soigneusement sans laissser d'air; attendre une minute; si la solution se décolore, diluer davantage la totalité du filtrat. Idéalement la décoloration doit survenir en 5 à 10min. Remplissez un deuxième tube comme le premier et placez-le à l’obscurité (papier d'aluminium ou cache noir sur la cuve à colorimétrie).

Comparez les temps de décoloration. Deux témoins avec du tampon + DCPIP seront réalisés au bureau (l'un à la lumière, l'autre à l'obscurité).

3 Réduction du DCPIP et dégagement de dioxygène

• Lancez le logiciel Sérenis selon les procédures habituelles (aide mémoire pour l'utilisation)
• L'oxymètre est déja réglé, ce qui suit est seulement un contrôle : vérifiez la position du bouton de droite de l'adaptateur (le triangle doit pointer sur le repère) et tournez si nécessaire le bouton de pente (celui de gauche) pour obtenir 21% dans l'air ou un peu moins), choisissez ensuite mesure dans l'eau.
• Paramétrez pour une durée d’aquisition de 120s, une mesure par s (120 points).
• Remplissez l'enceinte avec la suspension de chloroplastes; complétez avec du tampon si nécessaire; fermez délicatement avec le bouchon (ne pas créer de surpression qui percerait la membrane et ne pas laisser d'air); placez le cache noir; attendre 1 min.
• Lancez l'acquisition en cliquant sur le quatrième icône; après 30s approchez une lampe et enlever le cache pendant 60s; remettez le cache pour les 30s restantes;
• Enregistez la courbe dans votre espace personnel;
• Ajoutez 0,5ml de DCPIP et réalisez un deuxième essai; il n'est pas nécessaire de changer la suspension de chloroplastes; il est conseillé de superposer le graphe au précédent (grâce à la boite de dialogue qui apparait lors du lancement de l'acquisition). il serait aussi possible de faire un seul essai et d'ajouter le DCPIP à t₀ + 60s.
• Enregistez la (les) courbe(s) dans votre espace personnel.
• Facultatif : si les résultats sont corrects, changez la suspension de chloroplastes et recommencez le premier essai en utilisant un filtre rouge puis un filtre vert (30s à l'obscurité, 30s à la lumière rouge, 30s à la lumière verte et 30s à la lumière bleue).

En toute rigueur, deux témoins devraient être réalisés avec du DCPI dilué (remplacez la suspension de chloroplastes par de l'eau distillée) et avec une suspension de chloroplastes bouillis.